一． 原理
凱氏法測定樣品中的含氮量，即在催化劑作用下，用硫酸破壞有機物，使含氮物轉化成硫酸銨。加入強堿進行蒸餾使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，測出氮含量，將結果乘以換算系數6.25，計算出粗蛋白含量。
二． 試劑
1) 硫酸：化學純，含量為98%，無氮。
2) 混合催化劑：1g硫酸銅，9g硫酸鉀，均為化學純，磨碎混勻。
3) 氫氧化鈉：化學純，40%水溶液（m/v）。5%水溶液（m/v）
4) 硼酸：化學純，2%水溶液（m/v）。
5) 混合指示劑：甲基紅0.1%乙醇溶液，溴甲酚綠0.5%乙醇溶液，兩溶液等體積混合，在陰涼處保存期為三個月。
6) 鹽酸標準溶液：c(HC1)=0.1mol/L。8.3ml鹽酸（分析純），注入1000ml蒸餾水中。
7) 硼酸吸收液：2%硼酸溶液（20 g/L）：稱取100 g 硼酸，加水溶解后并稀釋至5000 mL。加入（1：3.5混合指示劑6ML）搖勻，再加入5%的氫氧化鈉稀釋溶液0.35ML搖勻，顏色呈紫紅色。
三． 儀器設備
1) 實驗室用樣品粉碎劑或研缽
2) 分樣篩：40目（孔徑0.45mm）
3) 分析天平：感量0.0001g
4) 消化爐（SKD-08S2）
5) 容量瓶100ml
6) 滴定管：10、25ml
7) 消化管：300ml
8) 定氮儀(SKD-2000)
四． 樣品的選取和制備
樣品粉碎后全部通過40目篩，裝于密封容器中，防止樣品成分的變化。
五． 分析步驟
1 樣品的消化
稱取樣品0.5~1g(含氮量5~80mg)準確至0.0002g，放入消化管中，加入5g混合催化劑，與樣品混合均勻，再加入10ml硫酸，將消化管置于消化爐上加熱，直至呈透明的藍綠色，然后在繼續加熱，至少30分鐘。
2 SKD-08S2消化爐
操作（6個樣品和2個空白）
按”SET”鍵+“A/M”鍵3秒，跳出**設置區程序參數修改界面。連續按“SET”鍵數次出來
檢查“RUN”=“3”，pro= “ 1 ” ，再設置r1 =200，T1=5分鐘，c1=180度，r2=180，T2=5,C2=250度，r3=180， T3=5, C3=350度，r4=200，T4=60，c4=410，r5=0，T5=0,C5=0度。。。。r32=0,t32=0,c32=0,設置好后等幾秒鐘，程序會自動保存。
再打開啟動開關（綠開關）-----------程序自動運行，自動結束。如果出現不運行，再檢查“RUN”設置為“3”，pro= “ 1 ” 。
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程序段
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R：斜率（min/℃）
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T：保溫時間
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C：目標溫度
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1
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200
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5
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180
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2
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180
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5
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250
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3
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180
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5
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350
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4
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200
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60
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410
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3 SKD-2000全自動定氮儀
樣品消化好后，冷卻至室溫。
蒸餾設置：堿45ml，稀釋液40ml，標準酸0.0953（mo/l），蒸餾功率100%，蒸餾時間6分鐘，硼酸儀器自動加。
測定結果
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編號
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樣品重量g
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空白（ul）
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標準酸濃度mo/l
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樣品消耗量ml
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蛋白含量%
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1
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0.9627
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65
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0.0953
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14.883
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12.8437
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|
2
|
0.8475
|
65
|
0.0953
|
13.102
|
12.8362
|
|
3
|
0.8428
|
65
|
0.0953
|
12.970
|
12.7768
|
|
4
|
0.9478
|
65
|
0.0953
|
14.635
|
12.8275
|
|
5
|
0.9904
|
65
|
0.0953
|
15.322
|
12.8543
|
|
6
|
0.9252
|
65
|
0.0953
|
14.267
|
12.8087
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平均值：12.8245
RSD（相對標準偏差值）: 0.002%
